摘要本研究聚焦桑树查尔酮异构酶（CHI）基因，通过RT-PCR技术从桑树叶片中克隆获得Morus_CHI基因全长cDNA序列。借助威尼德GenePulserX2双波全能型电穿孔仪，将重组表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)，分析该基因在不同组织及胁迫处理下的表达特性，为桑树次生代谢调控研究提供理论依据。引言查尔酮异构酶（CHI）是黄酮类化合物合成途径中的关键酶，在植物抗逆响应与药用成分合成中具有重要作用。桑树作为药食同源植物，其CHI基因的功能解析对挖掘黄酮类活性成分合成机...

摘要人源氨肽酶N（hAPN）在肿瘤侵袭、病毒感染等生理病理过程中具关键作用。本研究通过RT-PCR克隆hAPN全长编码区，构建pET-32a重组载体，借助威尼德MiniPulser399经济款电穿孔仪优化大肠杆菌BL21转化条件，实现hAPN在原核系统中的高效可溶性表达，为酶学特性分析及靶向药物研发提供标准化技术方案。引言人源氨肽酶N作为锌离子依赖性蛋白酶，广泛参与细胞外基质降解、信号转导及病原识别等重要生物学过程。其异常表达与多种恶性肿瘤的侵袭转移密切相关，同时作为冠状病毒...

摘要本研究聚焦马铃薯抗逆相关WRKY6基因，通过RT-PCR技术克隆目的基因，构建pET-28a重组表达载体，借助威尼德GenePulserX2双波全能型电穿孔仪优化农杆菌GV3101转化体系，实现WRKY6蛋白在拟南芥原生质体中的高效瞬时表达，为解析马铃薯逆境响应分子机制及抗逆品种改良提供关键靶标与技术支撑。引言马铃薯作为全球重要的粮菜兼用作物，其产量与品质受干旱、盐渍等逆境胁迫影响显著。WRKY转录因子家族在植物抗逆信号通路中扮演核心调控角色，其中WRKY6基因被证实参与...

摘要本研究针对猪流行性腹泻病毒（PEDV）M基因片段开展原核表达研究。通过RT-PCR扩增目的片段，构建pET-32a重组载体，借助威尼德GenePulser630指数衰减波电穿孔仪优化大肠杆菌Rosetta(DE3)转化条件，实现M蛋白高效可溶性表达，为PEDV诊断抗原制备及疫苗研发提供关键技术支撑。引言猪流行性腹泻（PED）是由PEDV引发的急性肠道传染病，严重危害全球养猪业。病毒膜蛋白（M蛋白）作为病毒结构的核心组分，其原核表达产物在病毒检测试剂开发及亚单位疫苗研究中具...

摘要本研究针对茶树黄酮醇合成酶基因开展克隆及原核表达分析。通过RT-PCR从龙井43茶树叶片中获取目的基因，构建pET-28a重组表达载体，利用威尼德GenePulser830方波型电穿孔仪转化大肠杆菌BL21(DE3)，实现目的蛋白高效诱导表达，为茶树次生代谢调控研究提供技术支撑。引言黄酮醇作为茶树次生代谢的重要产物，其合成通路关键酶——黄酮醇合成酶（FLS）的编码基因挖掘，对解析茶叶品质形成机制及分子育种具有重要意义。目前植物源FLS基因的原核表达常受限于转化效率与蛋白可...

摘要本研究系统探讨siRNA浓度梯度对微血管内皮细胞转染效率及细胞活性的影响规律。采用威尼德GenePulser630指数衰减波电穿孔仪，结合某品牌高纯度siRNA试剂，建立标准化转染体系。通过流式细胞术与荧光定量PCR验证，0.5-2.0μM浓度区间呈现显著剂量依赖性效应，为血管生物学研究提供精准转染策略。引言微血管内皮细胞作为血管稳态调控的核心单元，其基因功能研究对血管新生、炎症反应等病理机制解析具有重要价值。传统化学转染法在该细胞系中普遍存在效率低下（材料与方法2.1实...

摘要本研究通过系统优化电穿孔转染参数，建立稳定的大鼠血管内皮细胞siRNA递送体系。采用威尼德GenePulser830方波型电穿孔仪配合某品牌转染试剂，实现转染效率达89.7%±3.2，细胞存活率维持在83.5%±4.1。实验证实该组合在基因沉默效率、细胞相容性及实验重复性方面具有显著优势，为血管生物学研究提供可靠技术平台。引言血管内皮细胞功能调控研究是心血管疾病机制探索的重要方向。siRNA技术因其高特异性成为关键研究工具，但传统转染方法存在效...

摘要本研究通过对比脂质体法、阳离子聚合物法及电穿孔法在C6/36蚊细胞中的siRNA递送效率，建立标准化评价体系。结果显示，基于某品牌威尼德GenePulserX2双波全能型电穿孔仪的实验组转染效率达(92.3±1.8)%，显著优于传统方法（p引言蚊细胞系作为虫媒病毒研究的核心模型，其siRNA转染效率直接影响基因沉默效果。传统脂质体法存在细胞毒性大（存活率通常材料与方法2.1细胞培养体系C6/36细胞（白纹伊蚊胚胎细胞系）于28℃无CO₂培养箱中，采用Leib...