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7-23
Q1:PVDF膜和硝酸膜结合蛋白的原理是什么?A1:一般而言,硝酸纤维素膜是通过疏水作用来和蛋白质相联,若反复洗几次后,蛋白容易掉下来,效果较差。尼龙膜主要通过它膜上的正电荷和蛋白接合(注:常用的PVDF膜即带正电荷的尼龙膜),同时也有疏水作用,但相对较弱。这样的话,PVDF膜和蛋白接合较牢,不易脱落,效果较好。Q2:做组织样品的westernblot的时候,处理样品有什么诀窍?A2:必须进行研磨、匀浆、超声处理,蛋白质溶解度会更好,离心要充分,膜蛋白需用更剧烈的方法抽提,低...
7-23
经典实验步骤是将提取的蛋白电泳—转膜---一抗孵育---二抗孵育---底物显色---分析。我这几天几乎都在重复着这个过程,现在将自己试验过程记录下来,和大家一起分享,希望对新手有所帮助。1.蛋白提取传统方法是(1)组织称重(2)利用液氮、研钵粉碎组织块(3)加入RIPA缓冲液,PMSF(4)匀浆(15,000转/分*1分钟)维持4℃(5)加入PMSF冰上孵育30分钟,移入离心管4℃离心15分钟(6)上清液为细胞裂解液可分装-20℃保存。一部分进行Bradford比色法测定蛋白...
7-21
紫外线是指通过棱镜将自然光分成赤、橙、黄、绿、青、蓝、紫七色光,波长较紫色光更短的一类光线的总称.它广泛存在于自然界中,与人的生活密切相关。根据生物效应的不同,将紫外线按照波长划分为四个部分:A波段(UVA),又称为黑斑效应紫外线(400~315nm);B波段(UVB),又称为红斑效应紫外线(315~280nm);C波段(UVC),又称为灭菌紫外线(280~100nm);D波段(UVD),又称为真空紫外线(VacuumeUV)(200~10nm)。很多年之前,紫外线就已被用于...
7-21
威尼德紫外交联仪:在Northernblotting、Southernblotting、EMSA等尼龙膜、硝酸纤维素膜的交联、Sterilization(灭菌)、DNANicking(DNA缺失)的应用。紫外交联技术是一种常用于材料科学和化学领域的重要技术手段。随着材料研究的不断深入,紫外交联仪逐渐成为了广泛应用的分析设备。紫外交联仪利用紫外光对材料进行照射,通过能量的输入和材料分子之间的相互作用,实现材料的共价键形成或断裂。当紫外光照射在材料上时,光能激发材料内部的电子,使...