1、让凝胶电泳变得更快,更漂亮方法改进:将电泳电压进行定时变化,例如可以在开始时将电泳电压调节至100V,大约15min,使条带的确可以因为自身片段大小不同而产生较大差别的泳动速度,从而将片段分离,然而现在的分离或许会间距较小,从而图片很不漂亮,或者不易观察.可以紧接着进行120V-130V的电压进行较小差异电泳,但是由于电泳电压较大,可以避免过大的片段残存在胶孔不易泳动的情况.结果:这样两个电压进行配合电泳,便可以得到非常漂亮的电泳条带,并且可以节省1/5-2/5左右的时间...

基因克隆是指在体外将含有目的基因或其它有意义的DNA片段同能够自我复制的载体DNA连接，然后将其转入宿主细胞或受体生物进行表达或进一步研究的分子操作的过程，因此基因克隆又称DNA克隆、分子克隆、基因重组或重组DNA技术。基因克隆涉及一系列的分子生物学技术，如目的DNA片段的获得、载体的选择、各种工具酶的选用、体外重组、导入宿主细胞技术和重组子筛选技术等等。为了方便大家学习和交流，我以问答形式介绍基因克隆及其常见问题，希望对大家有所帮助。Q1：如何获取一个已知基因的序列？A1：...

1杂交溶液或洗涤溶液在使用前未预热2探针浓度过高或探针未变性。将杂交液装入杂交管时，体积减少，探针浓度发生了变化，应确保相应地调整探针浓度。3未从探针溶液中去除未结合核苷酸。4预杂交和杂交溶液中的预杂交或阻断剂不足，充分的预杂交对于阻止膜的非特异性杂交非常重要。5杂交或洗脱条件不够严格：6降低盐浓度。7提高温度。8增加SDS的浓度。9增加洗脱次数。10膜太干燥，这通常可能是明显重叠问题的原因，可能由以下原因引起：11探针体积太小。溶液更换速度太慢，尤其是批量更换处理时分子杂交...

1放射自显影期间膜对胶片的曝光时间不足。2核酸转移或结合在尼龙膜上的效率低3目标序列以非常低的拷贝数存在。增加加载到凝胶上的样品量。4没有足够数量的探针序列，增加探针的浓度或加入10%硫酸葡聚糖，这样减少了溶剂体积，可以到到相同的效果。5没有探针同源性。6双链DNA探针未变性，或者，探针检测仪性能下降。在使用RNA探针时发生可能更大。7探针的比活性太低。考虑诸如标记反应中的探针浓度、放射性标记的三磷酸盐的半衰期等因素。8杂交和/或洗涤过程中试验方法不佳：1）增加盐的浓度。2）...

常见问题Q1：标记方法有哪几种？A1：（1）切口平移法（2）随机引物法（3）末端标记法（4）单链DNA探针标记（5）寡核苷酸探针标记法Q2：探针标记物的分类有几种？A2：（1）探针标记物有放射性核素与非放射性物质两种。放射性核素标记敏感性高，可检测pg水平的核酸，但因不易长期保存，且存在放射性污染等问题，现已较少应用。（2）非放射性物质常用的有生物素、地高X等，非放射性探针安全、稳定、操作方便并且经济，但敏感性较低，近年来，由于杂交信号检测方法的改进，检测的敏感性得到了很大提...

核酸杂交(Nucleicacidhybridization)，又称核酸分子杂交。威尼德分子杂交仪原理：是核酸变性和复性理论。双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开形成单链，当理化因素消除后，具一定同源性的两条(探针和待测核苷酸序列)单链在适宜的温度及离子强度条件下，可按碱基互补配对原则特异性地复性形成双链。核酸分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进行。分类：核酸分子杂交按作用环境不同分为固相核酸分子杂交和液相核酸分子杂交。一、固相核酸分...

硝酸纤维素膜(nitrocellulosefiltermembrane，简称NC膜)，NC膜在NorthernBlot、SouthernBlot、WesternBlot中都需要用到，杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术目前较为常用，先将待测核酸结合到一定的固相支持物上，再与液相中的标记探针进行杂交。固相支持物常用硝酸纤维素膜。PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidenefluoride）是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔径有...

Q1:PVDF膜和硝酸膜结合蛋白的原理是什么？A1:一般而言，硝酸纤维素膜是通过疏水作用来和蛋白质相联，若反复洗几次后，蛋白容易掉下来，效果较差。尼龙膜主要通过它膜上的正电荷和蛋白接合（注：常用的PVDF膜即带正电荷的尼龙膜），同时也有疏水作用，但相对较弱。这样的话，PVDF膜和蛋白接合较牢，不易脱落，效果较好。Q2:做组织样品的westernblot的时候，处理样品有什么诀窍？A2:必须进行研磨、匀浆、超声处理，蛋白质溶解度会更好，离心要充分，膜蛋白需用更剧烈的方法抽提，低...