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威尼德分子杂交仪:核酸分子杂交中造成高背景的影响因数

发布时间: 2022-07-24  点击次数: 326次

 

1 杂交溶液或洗涤溶液在使用前未预热

 

2 探针浓度过高或探针未变性。将杂交液装入杂交管时,体积减少,探针浓度发生了变化,应确保相应地调整探针浓度。

 

3 未从探针溶液中去除未结合核苷酸。

 

4 预杂交和杂交溶液中的预杂交或阻断剂不足,充分的预杂交对于阻止膜的非特异性杂交非常重要。

 

5 杂交或洗脱条件不够严格:

 

6 降低盐浓度。

 

7 提高温度。

 

8 增加SDS的浓度。

 

9 增加洗脱次数。

 

10 膜太干燥,这通常可能是明显重叠问题的原因,可能由以下原因引起:

 

11 探针体积太小。溶液更换速度太慢,尤其是批量更换处理时分子杂交仪放置不平整。

可变轴角度过大。

 

12 膜上残留的琼脂糖可能导致背景模糊。在转化膜后和固定交联前(尤其是真空吸干后),应在2 x SSC中冲洗膜,以去除残留的琼脂糖和多余的盐。

 

13 多个过滤器在瓶子中没有用筛网隔开。

 

14 放射自显影问题。放射自显影图上的随机黑点和闪电"标记可能是由静电引起的。


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