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威尼德分子杂交仪:核酸分子杂交中杂交信号低于预期的影响因素

发布时间: 2022-07-24  点击次数: 278次

 

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1 放射自显影期间膜对胶片的曝光时间不足。

 

2 核酸转移或结合在尼龙膜上的效率低

 

3 目标序列以非常低的拷贝数存在。增加加载到凝胶上的样品量。

 

4 没有足够数量的探针序列,增加探针的浓度或加入10%硫酸葡聚糖,这样减少了溶剂体积,可以到到相同的效果。

 

5 没有探针同源性。

 

6 双链DNA探针未变性,或者,探针检测仪性能下降。在使用RNA探针时发生可能更大。

 

7 探针的比活性太低。考虑诸如标记反应中的探针浓度、放射性标记的三磷酸盐的半衰期等因素。

 

8 杂交和/或洗涤过程中试验方法不佳:

 

1)增加盐的浓度。

 

2)降低温度。

 

3)降低SDS的浓度。

 

4)减少清洗时间。

 

5)杂交时间太短。


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