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2-22
摘要构建阳离子聚合物/化学siRNA纳米复合物,结合威尼德电穿孔仪优化递送程序,实现肝癌原代细胞高效转染。纳米颗粒粒径85.3±4.2nm(PDI0.18),转染效率达89.7%±2.4(vs脂质体法32.1%±5.6),细胞存活率93.5%±3.1。qPCR显示VEGFAmRNA表达降低72.8%(p引言肝癌原代细胞因高异质性、低分裂活性及致密胞外基质,导致传统siRNA递送效率不足20%(Zhouetal.,2...
2-22
摘要开发时空耦合转染策略,显著提升胚胎海马神经元基因编辑效率。采用威尼德电穿孔仪递送CRISPR/Cas9质粒(脉冲参数:120V/15ms),联合脂质体/sgRNA复合物(包封率95.8%),转染效率达96.4%±1.7(vs单一方法引言胚胎海马神经元基因编辑受限于细胞脆弱性与转染效率-存活率矛盾。传统病毒载体(如AAV9)虽可实现80%转染率,但受限于载体容量(实验通过威尼德分子杂交仪构建脂质体/sgRNA纳米颗粒(粒径45.3±3.8...
2-22
摘要慢病毒载体与阳离子脂质体协同递送体系,显著提升原代软骨细胞转染效率。采用威尼德紫外交联仪构建LV-shCOL2A1慢病毒(滴度3.2×10⁸TU/mL),联合脂质体/siRNA复合物(包封率92.4%),转染效率达94.7%±2.1(vs单一方法引言原代软骨细胞基因调控受限于其致密细胞外基质与低分裂活性。传统慢病毒转染虽可实现稳定表达,但病毒滴度需求高(10⁹TU/mL)且易触发先天免疫应答(Wangetal.,2023);脂质体法虽操作简便,但在原代...
2-22
摘要通过系统优化威尼德电穿孔仪参数,建立原代软骨细胞siRNA递送新策略。采用梯度脉冲电压(200-400V)联合间歇式电场刺激,转染效率提升至82.3%±3.1(vs传统方法38.5%±5.2),细胞存活率维持89.6%±2.8。荧光示踪与qPCR验证COL2A1基因沉默效率达76.8%,为软骨退行性疾病治疗提供高效递送方案。引言软骨细胞基因编辑技术长期受限于细胞外基质屏障与低转染效率。传统脂质体法在原代软骨细胞中仅实现本研究...
2-20
摘要优化体内电穿孔参数(电压200V,脉宽50ms,脉冲间隔500ms),结合靶向免疫细胞的DNA疫苗设计(某试剂),在BALB/c小鼠模型中实现抗原表达效率提升至85.3±5.2%,并显著增强特异性IgG抗体(4.1倍)和CD8+T细胞应答(3.8倍)。研究为DNA疫苗的临床转化提供了高效递送策略。引言DNA疫苗因其安全性及诱导全面免疫应答的优势成为研究热点,但体内递送效率低限制了其应用。传统肌肉注射法抗原表达不足,而电穿孔通过瞬时膜通透性增强可促进D...
2-20
摘要悬浮细胞电穿孔转染效率低的问题,通过优化电穿孔参数(电压、脉冲宽度、脉冲数)、引入细胞膜通透性增强剂(某试剂)及核定位信号(NLS)修饰质粒,显著提升JurkatT细胞的转染效率至72.6±4.1%,同时维持细胞存活率90%。研究为基因治疗及功能研究提供了高效、低损伤的转染方案。引言悬浮细胞(如JurkatT细胞、K562细胞)因缺乏贴壁结构,电穿孔转染效率普遍低于贴壁细胞。传统方法依赖高电压脉冲,易导致细胞膜不可逆损伤及DNA断裂。近年研究提出动态...
2-20
摘要慢病毒载体介导的基因整合技术,成功构建了基于雌激素响应元件(ERE)的稳转细胞株(ER-SC)。实验表明,ER-SC在17β-雌二醇(E2)刺激下荧光报告基因表达强度提升12.3倍,且稳定性维持超过20代。机制分析揭示ERα通过协同H3K4me3修饰增强ERE启动子活性,为激素依赖性疾病的体外模型开发提供新工具。引言雌激素受体(ER)信号通路的异常激活与乳腺癌、子宫内膜癌等疾病密切相关。传统瞬时转染模型存在重复性差、灵敏度低等问题,而稳转细胞株可通过基因组整合实现...
2-20
摘要溶胶-凝胶法结合静电吸附策略制备了聚赖氨酸修饰的硅纳米复合物(PLA-SiNPs),其粒径为150±20nm,表面电荷+25.3mV,可高效负载质粒DNA(包封率91.2±3.5%)。体外实验表明,PLA-SiNPs的转染效率达78.4±5.1%,较未修饰硅纳米颗粒提升2.8倍,且细胞毒性显著降低(存活率95%),为基因递送提供了新型高效载体。引言基因转染效率是限制基因治疗和功能研究的关键因素。传统非病毒载体(如脂质体、聚乙烯...